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3. Técnicas de coloración para microscopia
BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR (BIO105)
Universidad Nacional del Altiplano de Puno
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INFORME N°
TÉCNICAS DE COLORACIÓN PARA MICROSCOPIA
I. OBJETIVOS:
- Comprender los pasos necesarios para realizar los diferentes métodos de
coloración.
- Identificar las diferentes estructuras microbianas o sanguíneas al igual que los
tipos de coloraciones que se utilizaron.
II. INTRODUCCIÓN:
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Los colorantes son sustancias que usualmente se utiliza en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos.
DEFINICIÓN DE TINCIÓN:
La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada.
TIPOS DE COLORACIONES:
a. COLORACIÓN GRAM: La tinción de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX y en la actualidad puede utilizarse para separar la mayoría de las especies bacterianas en dos grandes grupos: Las que captan el colorante básico, cristal violeta (es decir las bacterias gram positivas) Las que pierden ese colorante por el lavado con el de colorante alcohol o acetona (es decir las bacterias gram negativas) La tinción de gram es la técnica principal utilizada para el examen microscópico de las bacterias. Casi todas las bacterias de importancia clínica pueden detectarse con este método. Las únicas excepciones son: Los microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las células huésped (p. ej., clamidias). Los que carecen de pared celular (p. ej., micoplasmas y ureoplasmas). Los que tienen un tamaño insuficiente para ser observados por el microscopio óptico (p. ej., espiroquetas). Los que tienen una diferente composición en su pared y no captan los colorantes (p. ej., mycobacterias).
PASOS PARA LA COLORACIÓN GRAM:
- En primer lugar se prepara el material orgánico (en este caso el gargajo de un compañero) con la ayuda de un baja lenguas y un hisopo esterilizado.
- Seguidamente se fija el gargajo en la superficie del portaobjeto.
- Se pasa la muestra del portaobjeto por el mechero unas 3 o 4 veces para dejar secar.
- Se tiene que colocar el material en un soporte de coloración para poder iniciar con la tinción respectiva.
- Se colorea la superficie de la muestra con solución de cristal violeta y se espera al menos un minuto para dejar que el colorante tiña la muestra y seguidamente se lava la muestra con agua de caño.
- Se cubre la lámina con lugol, se tiene que esperar un minuto para después volver a lavar la muestra con agua de caño.
- Se tiene que cubrir toda la superficie con unas gotas de alcohol acetona y lavar nuevamente con agua de caño.
- Se cubre la superficie con safranina y lavar con agua de caño.
- Se deja secar la lámina.
- Para finalizar se puede examinar la muestra coloreada al microscopio con objetivo 100x de inmersión (con aceite)
b. COLORACIÓN (TÉCNICA DE ZIEHL NEELSEN) La tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes, como M. tuberculosis o el Phylum Apicomplexa entre otros.
PASOS PARA LA COLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN
1. Se coloca sobre el soporte de coloración una lámina fijada. 2. Se coloca el colorante fucsina básica fenicada. 3. Se debe calentar la muestra en un mechero de alcohol hasta que se emitan vapores. Se debe repetir este proceso tres veces. 4. Se debe lavar la muestra con agua y eliminar la fucsina. 5. Se cubre la muestra con solución de alcohol ácido hasta que se decolore y este del color rosa pálido y lavar la lámina con agua de caño. 6. Se tiene que cubrir la superficie de la muestra con colorante de azul de metileno y se debe esperar de 30 segundos a 1 minuto, para luego lavar con agua. 7. Secar en el medio ambiente la muestra.
La observación de la muestra coloreada mediante la técnica de Ziehl Neelsen tiene dos objetivos importantes.
- Determinar si en el extendido hay Bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR)
- Establecer el número aproximado de BAAR.
c. COLORACIÓN (TINCIÓN DE WRIGHT) La tinción de Wrigth es una técnica de coloración creada por el patólogo estadounidense James Homer Wright en 1902, a partir de la tinción de Romanowsky. Como la tinción de Romanowsky era inestable, Wrigth incorporó el metanol como disolvente y fijador.
PASOS PARA LA TINCIÓN DE WRIGHT
- Tomar una muestra de sangre y colocarla sobre la lámina porta objeto.
- Colocar sobre la muestra unas gotas de colorante Wright, se tiene que contar las gotas y dejar actuar durante 1 o 2 minutos.
- Se tiene que colocar el mismo número de gotas de solución amortiguada tamponada y mezclar.
- Dejar reposar la muestra por 10 minutos.
- Lavar con agua de caño.
- Finalmente dejar secar a temperatura ambiente y observar.
III. RESULTADOS:
Se pudo comprender la importancia de los diferentes métodos de tinción en la observación de la microscopia, los diversos métodos de coloración ayudan para una observación mejor. Se pudo observar que la tinción de Gram desempeña un papel clave en la identificación de las bacterias.
Esta técnica es un tipo de coloración diferencial, lo que implica el uso de
distintos colorantes con la finalidad de crear contraste entre las
estructuras que se desean observar, diferenciar y posteriormente
identificar.
La tinción de Ziehl-Neelsen sirve para identifica ciertos tipos de
microorganismos. Algunos de estos microorganismos son micobacterias
(por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis ), nocardias (por
ejemplo, Nocardia sp.) y algunos parásitos unicelulares (por
ejemplo, Cryptosporidium parvum ). Muchas de las bacterias pueden
clasificarse a través de una técnica común llamada tinción de Gram.
3. Esquematice la morfología de las células sanguíneas que ha observado
con la coloración Wright.
Globulos Rojos: Los eritrocitos se pueden observar de color rosa naranja pálido El granulocito basofilo se puede observar de color rosa intenso
Se puede observar que en general la muestra tiene un tono grisaceo.
3. Técnicas de coloración para microscopia
Asignatura: BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR (BIO105)
Universidad: Universidad Nacional del Altiplano de Puno
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